Przeniesienie genu antybiotyku peptydowego katelicydyny przywraca zabijanie bakterii w modelu heteroprzeszczepu mukowiscydozy 2

Jako kontrolę pozytywną zastosowano medium NB zamiast próbek i traktowano identycznie. Dodatkowo do próbek CF ASF dodano syntetyczny LL-37 (Louisiana State University Medical Center, Core Laboratories, Nowy Orlean, Luizjana, USA) w końcowych stężeniach 1, 10 i 100 .g / ml, które następnie traktowano jak inne próbki . Dane są wyświetlane jako średnie. SEM i zostały porównane przy użyciu ANOVA i testów końcowych dla studentów. Stężenia LL-37 / hCAP-18 określano stosując ilościowy test dot blot. Trzy mikrolitry rekonstytuowanego ASF kropkowano na nitrocelulozie i wykrywano jak opisano uprzednio, stosując przeciwciało poliklonalne przeciwko LL-37 / hCAP-18 (9). Stężenie określono przez oznaczenie ilościowe natężenia sygnału przy użyciu systemu AlphaImager 2000 Analysis (Alpha Innotec, San Leandro, California, USA) i porównanie z sygnałami ze znanych ilości syntetycznego peptydu. Immunobloty ASF przygotowano po oddzieleniu ASF za pomocą HPLC z odwróconymi fazami, jak opisano (9). W przypadku immunohistochemii, tkanki heteroprzeszczepowe utrwalono w formalinie i zatopiono w parafinie przy użyciu standardowych procedur. Po pocięciu, tkankę wybarwiono stosując poliklonalne królicze przeciwciało anty-LL-37 (1: 1000, przez noc, 4 ° C), a następnie sprzężone z peroksydazą drugorzędowe przeciwciało (owcze przeciwkrólicze) i DAB / H2O2 jako substrat. Wyniki Nasze badania przeprowadzono w modelu ludzkiego ksenoprzeszczepu oskrzelowego, w którym pierwotne komórki nabłonkowe z oskrzeli normalnych lub CF są wysiewane na tchawicę szczura i hodowane podskórnie w bokach nu / nu myszy BALB / c i utrzymywane przez trzy tygodnie w celu umożliwienia dojrzewania w pełni zróżnicowany nabłonek oddechowy. ASF odzyskany z normalnych heteroprzeszczepów zabił P. aeruginosa PAO1 i S. aureus ATCC 29213 skuteczniej niż ASF z ksenoprzeszczepów CF (Ryc. 1). Aby określić, czy niedobór aktywności przeciwdrobnoustrojowej wynika z obniżonego stężenia LL-37 / hCAP-18, stężenie tego peptydu określono przy użyciu specyficznego i czułego testu dot blot. Endogenne białko LL-37 / hCAP-18 wykryto na niskich, ale równoważnych poziomach w ASF ksenoprzeszczepów prawidłowych i CF (Figura 2c). Figura Aktywność antymikrobiologiczna ASF z ludzkich heteroprzeszczepów oskrzeli przeciwko Pseudomonas aeruginosa PAO1 (a) i Staphylococcus aureus ATCC 29213 (b). Przeszczepy ksenogeniczne przygotowano z prawidłowymi komórkami (NL) lub komórkami CF (CF) i częściowo traktowano wektorami adenowirusowymi H5.020.CBCFTR (AdCFTR), H5.020.CMVLL-37 (AdLL-37) lub H5.020. CMVPG3 (AdPG3). Strzałki wskazują liczbę CFU w inokulum (otwarta strzałka) lub w kontrole pozytywne NB (wypełniona strzałka). Figura 2 Ekspresja peptydu przeciwdrobnoustrojowego LL-37 / hCAP-18 przed i po adenowirusowym przeniesieniu jego cDNA do heteroprzeszczepów
[więcej w: psychoterapia grupowa warszawa, kaufland łódź godziny otwarcia, parafrenia ]

Tags: , ,

Comments are closed.

Powiązane tematy z artykułem: kaufland łódź godziny otwarcia parafrenia psychoterapia grupowa warszawa