Monoklonalne przeciwciało stymulujące tarczycę 7

Pokazaliśmy również, że te multimery TSHR dysocjowały w formy monomeryczne w odpowiedzi na wiązanie TSH (11). To indukowane ligandem tworzenie monomeru było specyficzne dla naturalnego liganda TSH, ponieważ monoklonalne TSHR-Ab z aktywnością blokującą tarczycę nie udawało naśladowania TSH i nie wykazywało tworzenia monomeru (R. Latif i wsp., Niepublikowane dane). Ponieważ stężenie stymulujących przeciwciał stymulujących TSHR u pacjentów z Graves w surowicy jest niskie (12, 13), nie byliśmy w stanie zbadać wpływu przeciwciał stymulujących TSHR na oligomeryczne formy TSHR przy użyciu surowic od pacjentów z chorobą Gravesa-Basedowa. Od wczesnego żądania klonowania. przejściowego monoklonalnego stymulowania IgG i blokowania TSHR-Ab (14), uzyskanego przez transformację komórek B krwi obwodowej od pacjentów Gravesa z wirusem Epsteina-Barr, kilku badaczy twierdziło również, że klonuje stymulujące TSHR przeciwciało monoklonalne (15. 18). Jednak te działania stymulujące tarczycę osiągnięto jedynie dzięki wysokim stężeniom IgG, a niektóre doniesienia nawet nie miały dowodu na specyficzne rozpoznanie antygenu TSHR. Ponadto, jak wspomniano wcześniej, stężenie TSHR-Ab w surowicy pacjentów z Graves jest niskie, jak wykazano przez neutralizację TSHR-Ab nanogramem ilości białka ektodomeny TSHR (13). Dlatego częstotliwość występowania komórek B wydzielających TSHR-Ab3 u tych pacjentów jest również bardzo niska. Aby uzyskać prawdziwe monoklonalne przeciwciało stymulujące TSHR, w ostatnich latach wygenerowano kilka modeli zwierzęcych choroby Gravesa-Basedowa (19-22). Do tej pory wykazano, że mysie przeciwciała monoklonalne TSHR-Ab wytworzone z tych modeli rozpoznają natywną konformację TSHR, ale wszystkie były bez aktywności stymulującej tarczycę (20). W związku z tym próbowaliśmy wytworzyć bardzo silne przeciwciało monoklonalne, które służyłoby jako sonda molekularna i ma potencjał terapeutyczny jako stymulator tarczycy. Poniżej przedstawiamy tak silne przeciwciało stymulujące TSHR, które powstało w wyniku nowego modelu choroby Gravesa-Basedowa na chomika ormiańskiego. Metody Komórki i wirus. Komórki jajnika chomika chińskiego trwale eksprymujące ludzki receptor tyreotropiny (komórki CHO-hTSHR lub komórki JPO9) (23) i kontrolne komórki CHO pozbawione hTSHR (komórki CHO lub komórki JPO2) zostały dostarczone przez G. Vassarta, Louvain Medical School, Bruksela, Belgia. Zastosowano również linię komórkową CHO trwale eksprymującą mysią TSHR (mTSHR) (cDNA kodujący mTSHR był dostarczony przez P. Kopp, Northwestern University, Chicago, Illinois, USA). Komórki te utrzymywano w pożywce Ham F12 (Mediatech Inc., Herndon, Virginia, USA) uzupełnionej 10% FBS (Mediatech Inc.), 100 U / ml penicyliny, 100 U / ml streptomycyny (Invitrogen Corp., Grand Island , New York, USA) i 400 .g / ml genetycyny (Invitrogen Corp.) w 37 ° C w 5% CO2. Wektor adenowirusowy zawierający pełnej długości hTSHR (AdTSHR) był propagowany, oczyszczany i mierzony zgodnie z wcześniejszym opisem (22). Zwierzęta i protokół immunizacji. Choroba Gravesa-Basedowa została wywołana u 6-8-tygodniowych żeńskich chomików ormiańskich (n = 10) zakupionych od Cytogen Research and Development Inc. (West Roxbury, Maine, USA). Wszystkie zwierzęta immunizowano domięśniowo 5x 1011 cząstkami adenowirusowego konstruktu AdTSHR trzykrotnie, w odstępie 3 tygodni, w taki sam sposób jak opisano dla myszy (22). Poziomy tyroksyny we krwi mierzono za pomocą testu papierowego dla noworodków (Diagnostic Products Corp., Los Angeles, California, USA). Fuzja hybrydomy i klonowanie monoklonalnych TSHR-Ab. Dwa chomiki tarczycy poddano selekcji w celu wytworzenia przeciwciał monoklonalnych przeciwko antygenowi TSHR. Trzy dni przed fuzją zwierzęta te pobudzono dootrzewnowo x 107 komórek CHO-hTSHR po traktowaniu mg / ml mitomycyny C (Roche Molecular Biochemicals, Indianapolis, Indiana, USA) w Sali F12 w 37 ° C dla 2 godziny, razem z 50 ul CFA (Sigma-Aldrich, St
[przypisy: encyklopedia zdrowia, jak zrobić chłopakowi dobrze ustami, leczenie lekomanii ]

Tags: , ,

Comments are closed.

Powiązane tematy z artykułem: encyklopedia zdrowia jak zrobić chłopakowi dobrze ustami leczenie lekomanii