Monoklonalne przeciwciało stymulujące tarczycę 5

Radioaktywność pozostającą na komórkach CHO-hTSHR po trzech przemyciach zmierzono po lizie komórek w N NaOH. Procentową konkurencję określono jako stosunek konkurencji przez próbkę do konkurencji przez pożywkę hodowlaną. W oparciu o wcześniejsze doświadczenia, kontrolne supernatanty dawały mniej niż 15% hamowania. Wykrywanie stymulowania i blokowania TSHR-Ab. Komórki CHO-hTSHR wysiewano w ilości 4 x 104 komórek na dołek na 96-studzienkowych płytkach na dzień przed badaniem. Wszystkie testy przeprowadzono trzykrotnie w nieobecności jakichkolwiek inhibitorów fosfodiesterazy. Aby stymulować CHO-hTSHR, supernatant hybrydomy (20 ul) rozcieńczono 1: 5 świeżą pożywką i inkubowano z komórkami w 37 ° C przez 2 godziny. Pożywkę odrzucono, a wewnątrzkomórkowe cykliczne AMP (cAMP) zmierzono metodą ELISA zgodnie z protokołem producenta (Amersham Pharmacia Biotech, Newark, New Jersey, USA). Stymulację wyrażono jako procentowy wzrost wytwarzania cAMP przez supernatant hybrydom podzielony przez wytwarzanie cAMP w pożywce. W oparciu o wcześniejsze doświadczenia, kontrolne supernatanty dawały mniej niż 200% stymulacji. Aby zbadać surowicę chomika, stymulację przeprowadzono podobnie, z tym wyjątkiem, że surowice rozcieńczono 1:10 świeżą pożywką. Podobny protokół został użyty do wykrycia blokowania TSHR-Ab. Komórki CHO-hTSHR inkubowano z 20 ul supernatantów hybrydomy oprócz 80 ul świeżej pożywki zawierającej 125 (j / ml TSH bydlęcej (końcowe stężenie TSH wynosiło 100 (j / ml). Blokowanie wyrażono jako procent redukcji cAMP wytworzonego przez supernatant testowy podzielony przez cAMP wytworzony przez medium. Normalne supernatanty przeciwciał kontrolnych powodowały w tym teście mniej niż 20% blokowania. Oznaczanie izotypu przeciwciała monoklonalnego IgG. Izotyp IgG przeciwciał monoklonalnych TSHR oznaczono stosując kombinację dostępnych na rynku monoklonalnych przeciwciał przeciwko chomiczce Armenii IgG1, IgG2 i IgG2 i IgG3 (BD Pharmingen) jako przeciwciałom wtórnym na cytometrii przepływowej z komórkami CHO-hTSHR. Izotypy IgG2 i IgG3 oznaczono odpowiednio przez pozytywne IgG2 i pozytywne IgG2 i IgG3 i negatywne IgG2 i pozytywne IgG2 i IgG3. Analiza epitopów monoklonalnych przeciwciał przeciwko TSHR. Liniowe epitopy wykrywano przy użyciu peptydów hTSHR, jak opisano wcześniej (25). W skrócie, peptydy hTSHR dostarczone przez J. Morrisa (Mayo Medical School, Rochester, Minnesota, USA) (26) zostały użyte do pokrycia 96-studzienkowych płytek do mikromiareczkowania, tak jak w teście IgG. Dodano pięć mikrolitrów supernatantów hybrydomy, a kolor opracowano przy użyciu tych samych odczynników, co w oznaczeniu chomika IgG. W celu zbadania, czy przeciwciała monoklonalne rozpoznają konformacyjne epitopy antygenu TSHR, komórki CHO-hTSHR utrwalono 4% paraformaldehydem / PBS (Sigma-Aldrich) w temperaturze pokojowej przez 10 minut. Po dwukrotnym przemyciu komórek, przeciwciało monoklonalne inkubowano i zmierzono intensywność fluorescencji za pomocą cytometrii przepływowej. Kontrolne komórki CHO również utrwalono, aby służyły jako kontrola negatywna. Do mapowania epitopów stosowano również komórki CHO trwale eksprymujące warianty TSHR znakowane białkiem zielonej fluorescencji (GFP). Komórki NC35 z nierozerwalną TSHR-GFP wykazywały ekspresję TSHR bez insercji 50 aminokwasów, reszt 317. 366 (27) (cDNA należycie dostarczone przez B. Rapoport, University of California, Los Angeles, Los Angeles, Kalifornia, USA). Oznaczanie TSHR zostało opisane wcześniej (10). Nasze. 316,. 366 i. 409 komórki wyrażały tylko TSHR. podjednostki rozpoczynające się resztami 316, 366 i 409. Te komórki wariantu TSHR (a) otrzymano jako matrycę z użyciem produktów amplifikacji PCR z pełnej długości cDNA TSHR w pBluescript SK + (Stratagene, La Jolla, Kalifornia, USA). W każdym przypadku użyto pojedynczego startera odwrotnego odpowiadającego końcowi karboksylowemu TSHR (5a-CAGAGGCGCCGCCCAGGTCCCTGGGCACGTCGAG-3.)
[podobne: fizjoterapia uroginekologiczna, przychodnia salus, kaufland łódź godziny otwarcia ]

Tags: , ,

No Responses to “Monoklonalne przeciwciało stymulujące tarczycę 5”

  1. Jadwiga says:

    owoce kolcowoju spożywane bez zastanowienia mogą prędzej zaszkodzić niż poprawić zdrowie

  2. Anastazja says:

    [..] Artukul zawiera odniesienia do tresci: aparat dentystyczny[...]

  3. Mercury Reborn says:

    Oczywiście poszłam po drugą opinię, żeby potwierdzić pierwszą

  4. The Howling Swede says:

    [..] Artukul zawiera odniesienia do tresci: leczenie bólu[...]

  5. Mr. Wholesome says:

    Nic mi sie nie dzieje od momentu wizyty.

Powiązane tematy z artykułem: fizjoterapia uroginekologiczna kaufland łódź godziny otwarcia przychodnia salus