Monoklonalne przeciwciało stymulujące tarczycę 2

Inne przeciwciała podobnie utraciły swoją reaktywność na utrwalonych komórkach CHO-hTSHR (tabela 2). Należy zauważyć, że ta procedura nie wyeliminowała antygenu TSHR na komórkach CHO-hTSHR, ponieważ mysie przeciwciało monoklonalne RSR-1 (które rozpoznaje liniowe reszty 381. 385) (29) wyraźnie wykazało immunoreaktywność zarówno z nieutrwalonymi, jak i stałymi komórkami CHO-hTSHR ( Ryc. 3, c i d, odpowiednio). Dane te były również poparte brakiem reaktywności w analizach Western (dane nie pokazane). Zatem wszystkie te przeciwciała monoklonalne rozpoznały konformacyjne epitopy antygenu TSHR. Figura 3 Rozpoznanie epitopu konformacyjnego TSHR według MS-1. MS-1 rozpoznał natywną konformację antygenu hTSHR na nieutrwalonych komórkach CHO-hTSHR (a), ale nie na utrwalonych komórkach CHO-hTSHR (b). W przeciwieństwie do MS-1, mysi monoklonalny TSHR-Ab RSR-1 (29) rozpoznał konformacje natywnego (c) i stałego (d) hTSHR. Cienkie i grube linie oznaczają barwienie odpowiednio komórek CHO i CHO-hTSHR. Intensywność fluorescencji mierzono w FL-1. Aby dalej badać możliwe epitopy tych przeciwciał monoklonalnych, użyto czterech linii komórkowych CHO trwale eksprymujących warianty hTSHR. Komórki NC35 wyrażały nierozerwalną TSHR po delecji reszt TSHR 317. 366 (27). Nasze. 316,. 366 i. 409 komórki wyrażały tylko TSHR. podjednostki rozpoczynające się od reszt 316, 366 i 409, odpowiednio. Spośród przebadanych przeciwciał monoklonalnych żaden nie rozpoznał białek-Variant TSHR (tabela 2). Przeciwnie, MS-1 (Figura 4c) i TAb-8 (Tabela 2) rozpoznawali antygen TSHR wyrażany na komórkach NC35, ale inne przeciwciała monoklonalne nie (Tabela 2). Dane te wskazują, że epitopy konformacyjne rozpoznawane przez monoklonalne przeciwciała MS-1 i TAb-8 były bardziej prawdopodobne na TSHR. podjednostka i że TAb-4, TAb-6 i TAb-16 nie mogą wiązać się w nieobecności reszt TSHR 317. 366, region polipeptydu poddany rozszczepieniu TSHR. Ponieważ delecja insercji tego aminokwasu przez TSHR nie zmniejszyła immunoreaktywności MS-1 (Figura 4, a i c) ani TAb-8 (Tabela 2) epitopy konformacyjne tych przeciwciał monoklonalnych nie obejmowały tego regionu. Ta obserwacja była również zgodna z wcześniejszymi badaniami pokazującymi, że rozszczepienie TSHR nie było konieczne do wiązania TSH lub aktywacji TSHR (4, 31). Te dane zatem również potwierdziły niską immunoreaktywność, którą obserwowaliśmy dla peptydów reprezentujących 50 reszt aminokwasowych usuniętych w komórkach NC35 (Tabela 2). Doszliśmy do wniosku, że te dwa przeciwciała monoklonalne, MS-1 i TAb-8, miały główne epitopy konformacyjne, które nie zawierały regionu cięcia. Figura 4 Rozpoznawanie ektopope w resztach TSHR 317. 366 przez TAb-4, ale nie MS-1. MS-1 reagował podobnie do obu komórek CHO-hTSHR (a) i NC35 (c). Jednakże, silna immunoreaktywność obserwowana na komórkach CHO-hTSHR (b) przez TAb-4 została utracona na komórkach NC35 (d) bez reszt TSHR 317. 366. Grube linie wskazują komórki CHO-hTSHR w komórkach aib, a NC35 w komórkach cid. Cienkie linie oznaczają komórki CHO. Intensywność fluorescencji mierzono w FL-2. Indukcja cięcia TSHR według TSH, ale nie MS-1. TSHR podlega modyfikacjom posttranslacyjnym, w tym rozszczepieniu wewnątrzcząsteczkowym, które generują strukturę podwójnej podjednostki (a lub A i B lub B) (2, 3), a następnie zrzucają się zewnątrzkomórkowe. podjednostka (7). Zbadaliśmy, czy TSH i MS-1 miały jakikolwiek wpływ na cięcie wewnątrzcząsteczkowe TSHR, stosując technikę obejmującą dwa przeciwciała monoklonalne przeciwko regionowi poddanemu cięciu TSHR (RSR-4) i regionom nierozszczepienia (RSR-1). Swoistość przeciwciała RSR-4 została potwierdzona przy użyciu komórek CHO-hTSHR i NC35 przez wykazanie obecności wiązania przeciwciała na CHO-hTSHR, ale nie na komórkach NC35 (dane nie pokazane). Wykazano, że RSR-1 ma silnie hamujący wpływ na wiązanie TSH, podczas gdy RSR-4 nie wykazuje aktywności konkurującej z TSH (dane nie przedstawione)
[hasła pokrewne: centrum rehabilitacji kraków, zgrubienie opłucnej, odma opłucnowa rehabilitacja ]

Tags: , ,

Comments are closed.

Powiązane tematy z artykułem: centrum rehabilitacji kraków odma opłucnowa rehabilitacja zgrubienie opłucnej